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Método cuantitativo para el aislamiento y la determinación de la morfina en el opio y en las preparaciones medicinales Se describe un ensayo de morfina en opio bruto y preparaciones medicinales, basado en la purificación cromatográfica del alcaloide, que se determina posteriormente volumetricamente. A pesar de los muchos métodos publicados sobre la estimación de la morfina en el opio crudo, no existe actualmente ningún método satisfactorio disponible que permita la determinación cuantitativa del alcaloide con facilidad y exactitud confiable. Los métodos de ensayo de la morfina en el opio que se dan en la mayoría de las farmacopeas se basan en el tratamiento de la cal con la formación de sal de calcio, su posterior separación de los alcaloides y otras sustancias interferentes y finalmente la determinación volumétrica de la morfina aislada. Otros métodos que utilizan el método polarográfico 2. Colorimétrico 3. Y los procedimientos de intercambio iónico 4, también se han descrito. Últimamente, los métodos que defienden la adsorción de los alcaloides del opio sobre la alúmina 5. Y florisil 6 columnas han sido publicadas. Los métodos oficiales de la farmacopea tienen la desventaja de ser complicados y requieren muchas manipulaciones largas y tediosas, lo que implica una pérdida de precisión. (Este último hecho es contrarrestado en la Farmacopea británica por la adición de un factor del diez por ciento del contenido de morfina al resultado obtenido.) El problema principal en el ensayo de la morfina en el opio radica en la dificultad con la que puede separarse De los otros alcaloides que se producen naturalmente en el opio, debido a sus propiedades físicas y químicas similares. Sin embargo, existen algunas diferencias en sus solubilidades en disolventes orgánicos. Los datos sobre las diferentes solubilidades de los alcaloides de opio en diversos disolventes orgánicos fueron publicados por Klyachkina 7. Instituto Gubernamental para la Estandarización y Control de Productos Farmacéuticos, Ministerio de Salud, Gbno. Laboratorios Centrales, Jerusalén-Israel. Las cifras entre paréntesis se refieren a las cifras de la bibliografía de esta sección. A partir de este trabajo sabemos que la morfina es prácticamente insoluble en disolventes orgánicos como benceno, éter, etc. mientras que los otros alcaloides de opio son bastante solubles en estos disolventes. Por lo tanto, se intentó hacer uso de estas diferencias, en condiciones bien definidas y controladas, es decir, empleando cromatografía, cuando se esperaba que el aislamiento de morfina podría lograrse. Nuestra tarea consistió, pues, en encontrar una solución simple y práctica a cada uno de los siguientes problemas: Extracción completa de morfina del opio crudo. Elección de un adsorbente adecuado para los alcaloides extraídos. Eliminación de los alcaloides acompañantes distintos de la morfina y sustancias interferentes. Elección del agente de elución adecuado para la recuperación cuantitativa de la morfina purificada. En el siguiente informe se describe un método corto y sencillo en el que las sustancias interferentes que acompañan se eliminan mediante el uso de una columna de adsorción, y el alcaloide purificado en el eluato se determina volumetricamente. El primer paso en la determinación de la morfina consiste en su extracción completa del opio crudo. Después de haber ensayado diferentes procedimientos, tales como extracción con ácidos y álcalis en diferentes concentraciones ya diferentes temperaturas, y extracción con agua destilada solamente, a diversas temperaturas, se aceptó la técnica descrita más adelante como la más adecuada. La extracción con ácidos resultó ser insatisfactoria, debido a la liberación simultánea de material de color oscuro del opio crudo. Las sustancias coloreadas no pudieron separarse del alcaloide en la etapa cromatográfica subsiguiente. La extracción alcalina, por otra parte, produjo una solución que contenía el correspondiente morfinato, que resultó sumamente difícil de eluir de la columna cromatográfica en la etapa subsiguiente. Ambos procedimientos tenían que ser descartados. El agua destilada aseguró la extracción completa de la morfina presente siempre que la extracción se realizara a 60 grados C durante al menos dos horas. Un aumento adicional en la temperatura o el aumento del tiempo de extracción simplemente se añadió a la cantidad de sustancias interferentes que también entran en solución. Por otra parte, la incubación a 37 grados C durante 24 horas nos dio resultados similares a la extracción a 60 grados C. Sin embargo, el período de dos horas de extracción fue finalmente adoptado en el ensayo descrito. La exhaustividad de la extracción de morfina total de opio crudo por el procedimiento descrito anteriormente se verificó por medio de la B. P. Y U. S.P. Métodos para la determinación de la morfina en el opio. Se ensayaron varias sustancias tales como permutita, ácido silícico, alúmina, celita, mezclas de celite con alúmina y celita con magnesia en cuanto a su capacidad de adsorber los diferentes alcaloides de opio y / o impurezas. Estos adsorbentes se colocaron en una columna cromatográfica consistente en un tubo de vidrio de 280 mm. De altura y con un diámetro interior de 22 mm. Constreñida en el extremo inferior para encajar en un tapón de caucho perforado. Varias cantidades de adsorbentes que dan columnas desde 2 cm. A 10 cm. En altura se empaquetaron a diferentes grados de estanqueidad mediante la aplicación adecuada de una bomba de vacío. Varias cantidades del extracto acuoso que oscilan entre 2 y 10 ml. Se utilizaron en estos experimentos preliminares, lo que dio los siguientes resultados: Permutita adsorbido ni alcaloides de opio, ni impurezas. El ácido silícico absorbió la morfina pero no permitió su recuperación sin la eliminación simultánea de impurezas. Cuando se usó alúmina, se encontró que algunos agentes eluyentes tales como éter o benceno no eliminaban ni morfina ni otros alcaloides, mientras que disolventes tales como cloroformo eliminaban tanto la morfina como los alcaloides que la acompañaban. La Celite fue la sustancia más eficiente y conveniente de usar. Las mezclas de celita y alúmina o magnesia no mejoraron la eficacia de la columna, la alúmina produciendo de hecho soluciones coloidales indeseables con el agente eluyente. Por lo tanto, se adoptó la celita como el adsorbente más adecuado, seis gramos de los cuales se usaron en el tubo cromatográfico descrito anteriormente empacado firmemente a una columna de aproximadamente 80 mm. En Altura. Bajo estas condiciones cinco ml. Del extracto acuoso fueron óptimas. Para determinar el pH óptimo para la mejor separación de la morfina de los otros alcaloides de opio y sustancias interferentes que lo acompañan, se realizaron varios experimentos sobre columnas ajustadas a diferentes valores de pH, añadiendo uno de los siguientes reactivos en diversas concentraciones al extracto acuoso antes Vertiéndolo en la celita: ácido clorhídrico, ácido acético y mono-potasio-dihidrogenofosfato. Las columnas ácidas se rechazaron, ya que la partición de los solutos del medio acuoso que tenía un pH inferior a 7, se encontró que daba resultados insatisfactorios. Se encontró que las columnas que tenían un pH mayor que 7 eran mucho más adecuadas para nuestro propósito. La adición de 0,3-0,5 ml. De amoniaco concentrado a 5 ml. Del extracto de opio antes de la aplicación a la columna demostró que permitía la separación deseada de los alcaloides sin dificultad. Igualmente, al hacer alcalinizar la fase acuosa con una solución débil de hidróxido de sodio, se consiguió una buena separación de los solutos, pero se prefirió el uso de amoníaco porque cualquier traza de esta base que pasaba a través de la columna en el eluato podría ser fácilmente eliminada Antes de la titulación por simple calentamiento. Por lo tanto, los resultados de los análisis así obtenidos resultaron ser más reproducibles. Para el transporte selectivo de los solutos de la fase acuosa se probaron los siguientes disolventes orgánicos y mezclas: benceno, éter etílico, etanol, acetona, cloroformo, isobutanol, metanol, CCl4. Éterisobutanol 4: 1, cloroformo-isobutanol 4: 1, fenol 1% en cloroformo, cloroformo-metanol 3: 1 y cloroformo-etanol 3: 1 en volumen. De estos bencenos se encontró más adecuado bajo las condiciones anteriores para la eliminación de alcaloides distintos de la morfina y cloroformo-etanol para la elución de la propia morfina, dejando la materia colorante, etc. adsorbida sobre la columna de celite. Aproximadamente 100 ml. De la mezcla de cloroformo-etanol resultó ser suficiente para la elución completa de la morfina de la columna de Celite adoptada, preparada como se describe en el procedimiento experimental. (Ver figura 1). A partir del eluato obtenido, que contiene la morfina, el cloroformo-etanol se separó por destilación en un baño de agua en ebullición. Para asegurar la eliminación completa de posibles trazas de amoníaco, sin embargo, sin exponer el residuo a ninguna alteración oxidativa por calentamiento excesivo, se adoptó el procedimiento como se describe a continuación. Secado del residuo a 100oC. En un horno o bajo presión reducida a temperaturas más bajas no dio mejores resultados que simplemente hirviéndolo en el baño de agua. Incidentemente, este último procedimiento también hizo que las huellas de materia colorante que quedaban con los cristales de morfina en el residuo se hicieran cocidos juntos, de manera que no interfirieran en la posterior titulación de la morfina aislada. Figura 1 Celite nº 545 o 655 (Johns-Manville, tierra de diatomeas) Etanol absoluto, U. S.P. Solución de amoníaco, U. S.P. Hidróxido de sodio A. R. Se emplea una solución de N / 100, preparada adecuadamente diluyendo una solución patrón N / 10. Sulfato de sodio, anhidro. Ácido sulfúrico, conc. ARKANSAS. Cloroformo-etanol abs. mezcla. Mezclar 3 partes de cloroformo con 1 parte de etanol absoluto. Solución Indicadora Shiro-Tashiro. Mezclar 2 partes de 0,1 por ciento de solución de rojo de metilo en 96 por ciento de etanol con 5 partes de 0,1 por ciento de solución de azul de metileno en 96 por ciento de etanol. A. Extracción de la morfina. Cinco gramos de opio finamente pulverizado se trituran en un mortero de porcelana con ca.10cc. De agua destilada durante 15 minutos. La suspensión resultante se transfiere entonces a una 250cc tarada. Erlenmayer frasco con la ayuda de una botella de pulverización conteniendo agua destilada caliente, hasta que el aumento de peso total es de 50 gramos. El matraz se tapa y se agita vigorosamente durante treinta minutos. El matraz se sumerge luego en un baño de agua a 60 grados C durante dos horas. El extracto resultante se centrifuga a 2000 r. p.m. Durante diez minutos y la solución sobrenadante finalmente se filtró a través de un filtro de papel (Whatman No. 1). El extracto está ahora listo para el siguiente paso. B. Separación de los alcaloides en una columna cromatográfica Colocar cinco gramos 3 en un tubo de ensayo, añadir 0,3-0,5 ml. De amoníaco concentrado, cubrir con una almohadilla de lana de algodón y agitar suavemente. Retire la almohadilla de algodón con una pinza y vierta el contenido del tubo de ensayo en la columna de partición, utilizando la lana de algodón para transferir cualquier partícula de alcaloide precipitado que se adhiera a las paredes del tubo de ensayo. Coloque la lana de algodón en la columna y presione hacia abajo con una varilla de vidrio. Lavar el tubo de ensayo dos veces con 5 ml. Porciones de benceno cada uno y verter en la columna. Por conveniencia tome 5ml. Y corregir para gravedad específica de 1,02. Llene la columna con benceno y permita que Celite se empapen. Tan pronto como las primeras gotas de benceno empiecen a caer desde el extremo inferior del tubo, conecte el matraz receptor a una bomba de vacío, ajustando la velocidad de flujo a aprox. 2 gotas por segundo. Un total de aproximadamente 150 ml. De benceno para humedecer la columna y lavar los otros alcaloides de opio. Cuando prácticamente todo el benceno ha pasado a través de la columna de Celite, el vacío se libera lentamente (para evitar el desplazamiento de la columna de Celite por la formación repentina de contrapresión). El matraz receptor se reemplaza por un matraz de vacío limpio y 150 ml. De cloroformo-etanol absoluto (3: 1) en la columna a partir de un embudo de separación suspendido de la parte superior de la columna. El vacío se aplica de nuevo para producir la misma velocidad de flujo. Tenga en cuenta que la Celite debe estar cubierta en todo momento con disolvente. Cuando todos excepto 1-2ml. Del disolvente por encima del nivel de Celite de la columna ha pasado, el vacío se libera cuidadosamente. El eluido se transfiere cuantitativamente a 400 ml. Erlenmeyer frasco. C. Destilación del disolvente La mezcla de cloroformo-alcohol se separa ahora por destilación de un baño de agua en ebullición. Al residuo en el matraz se a~nadieron cinco ml. De etanol absoluto, neutro al indicador de Shiro-Tashiro, y se destilan nuevamente. Una porción adicional de 5 ml. Etanol abs. Y la destilación se repite una vez más. El matraz Erlenmeyer se deja en el baño de agua hirviendo durante 20 minutos adicionales para asegurar la eliminación completa de las trazas restantes de amoníaco. D. Determinación volumétrica de la morfina Cincuenta ml. De N / 100H2SO4 al residuo en el matraz de Erlenmeyer, y la solución se calienta a ebullición sobre una llama abierta durante aproximadamente 3 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente sumergiendo el matraz en agua helada, el exceso de ácido está de nuevo con N / 100 NaOH, usando 1 ml. 4 Shiro-Tashiro como indicador. Una pequeña almohadilla de lana de algodón se empaqueta en el vástago estrecho del tubo de separación de 280 mm. En altura y 22mm. En diámetro interior. Sulfato de sodio anhidro. Se añade hasta que se forma una capa de aproximadamente dos centímetros de espesor. Esto se mantiene en su lugar por algodón de lana empaquetado por una vara de vidrio. 4 Cerca de 6 grms. De Celite se aspira a una altura de unos 80 mm. Con la ayuda de una varilla de vidrio para asegurar la uniformidad del adsorbente en la columna. Finalmente se coloca una pequeña almohadilla de lana de vidrio sobre la capa de Celite. Usualmente 15 gotas eran suficientes, pero en algunos casos era necesario añadir gotas adicionales del indicador para obtener un punto final afilado. Para determinar la exactitud de nuestro método propuesto, hicimos una solución de morfina que contenía 50 mg. Del clorhidrato en 5 ml. Correspondiente a 36 mg. De la base libre. Los resultados de los análisis obtenidos por nuestro método fueron en promedio de 35,5 mg. Que caen dentro de los límites de 35,5 a 36,5 mg. A continuación, se prepararon varias mezclas de alcaloides, que contenían, además de morfina, algunos de los otros alcaloides de opio naturales en diversas proporciones. Los resultados de la estimación de la morfina en tales mezclas y de la recuperación de una cantidad pesada añadida a un extracto de opio se indican en la tabla I siguiente: (A.) RECUPERACIÓN DE MORFINA A PARTIR DE MEZCLAS CON OTROS ALCALOIDES DE OPIUM Tabla IA método simple y preciso para la Se sugiere el ensayo de morfina en opio crudo y preparaciones medicinales, que se basa en su separación de los alcaloides que lo acompañan y otros materiales interferentes mediante cromatografía. Los resultados obtenidos por este método resultaron ser reproducibles. El método propuesto es igualmente aplicable a las preparaciones medicinales, tales como tinturas, extractos y mezclas de alcaloides que contienen morfina. Cuando el etanol está presente en las preparaciones, debe eliminarse primero por destilación antes de su aplicación sobre la columna. Esto se logra fácilmente expulsando el etanol por inmersión parcial en un baño de agua hirviendo y luego completando el volumen original con agua destilada. Las trazas de etanol no interfieren. En cuanto a los otros alcaloides de opio que son eliminados por el benceno: aunque obtenidos en un estado purificado liberado del material colorante acompañante y otras impurezas, no pudieron determinarse volumetricamente, ya que no todos son titulables desde el punto de vista estoquimétrico. Sin embargo, su separación y el aislamiento de los alcaloides individuales podría ahora ser posiblemente intentado con resultados prometedores. Se propone un ensayo de morfina en opio crudo y preparaciones medicinales, basado en la separación cromatográfica del alcaloide, que se determina entonces volumetricamente. Se ha desarrollado un simple método de adsorción cromatográfica para separar la morfina de los alcaloides que lo acompañan y de las sustancias interferentes presentes en el opio crudo. El sistema de separación consiste en una columna de adsorción de Celite, humectada por un extracto de opio acuoso amoniacal. Los alcaloides distintos de la morfina se lavaron con ayuda de benceno, mientras que se empleó una mezcla de alcohol etílico de CHCl $ ₃ $ como agente eluyente para la morfina purificada aislada. El método propuesto es corto, simple y da resultados reproducibles. Los autores desean expresar su sincero agradecimiento al químico de la Secretaría de las Naciones Unidas por el amable interés que ha asumido en el curso de este trabajo y por el cuidado en el suministro del material utilizado. 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Hsieh, Hsieh-Hung Yeh, Tzu-Jin Liu, Sa-Lly y Wu, Tzong-Lin 09355960 Cl. xa0H01Lxa023 / 5384. Liao, Wen - Huang y Huang, Hsien - Mao 09352466 Cl. xa0B25Jxa09 / 1697. Liu, Yung-Tsun 09356104 Cl. xa0H01Lxa029 / 41775. Lu, Wei-Yuan Su, Lilly Huang, Chun-Hung Li, Chii-Horng y Chen, Jyh-Huei. Cl. xa0H01Lxa029 / 7816. Suen, Shich-Chang Chan, Chin-Hsiang Chen, Liang-Guang y Lu, Yung-Cheng 09352443 Cl. xa0B24Bxa037 / 34. Wang, Chin-Shan Lin, Jian-Hong y Lee, Shun-Yi 09356016 Cl. xa0H01Lxa027 / 0629. Wang, Mill-Jer Peng, Ching-Nen Lin, Hung-Chih Lin, Wei-Hsun Hsu, Sen-Kuei y Liu, De-Jian 09354254 Cl. xa0G01Rxa01 / 07364. Wu, Ming-Tung Hsieh, Yuan-Chih Chao, Lan-Lin y Tsai, Chia-Shiung 09355882 Cl. xa0H01Lxa021 / 6838. Taiwán Semiconductor Manufacturing Company Limited: Ver-- Colinge, Jean-Pierre Dhong, Sang Hoo Guo, Ta-Pen y Wu, Chung-Cheng 09356020 Cl. xa0H01Lxa027 / 088. Tsai, Cheng-Hsiung Lee, Chung-Ju Tsai, Tsung-Jung y Chang, Yu-Sheng 09355865 Cl. xa0H01Lxa021 / 32139. Wang, Tzu-Jui Chou, Keng-Yu Chuang, Chun-Hao Hsu, Ming-Chieh Lin, Ren-Jie Liu, Jen-Cheng y Yaung, Dun-Nian 09356069 Cl. xa0H01Lxa027 / 14685. Taiwán Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Ver - Chang, Chi-Wen Lee, Hui Yu Liu, Ya Yun Kuan, Jui-Feng y Cheng, Yi-Kan 09355205 Cl. xa0G06Fxa017 / 5077. Chang, Chi-Yang Chu, Wen-Ting Tu, Kuo-Chi Liao, Yu-Wen Chen, Hsia-Wei y Yang, Chin-Chieh 09356072 Cl. xa0H01Lxa027 / 2436. Chang, Shih-Ming Liu, Ru-Arma Hsieh, Ken-Hsien Shieh, Ming-Feng Lai, Chih-Ming y Gau, Tsai-Sheng 09356021 Cl. xa0H01Lxa027 / 088. Chang, Yi-Feng y Lee, Jam-Wem 09356012 Cl. xa0H01Lxa027 / 0259. Chen, Hsien-Wei Yu, Tsung-Yuan Cheng, Ming-Da y Lu, Wen-Hsiung 09355906 Cl. xa0H01Lxa021 / 78. Chen, Hsien-Yu Yu, Tsung-Yuan Tsai, Hao-Yi Lii, Mirng-Ji y Yu, Chen-Hua 09355978 Cl. xa0H01Lxa024 / 13. Chen, Meng-Ku Lin, Hung-Ta y Chang, Huicheng 09356102 Cl. xa0H01Lxa029 / 267. Chen, Tung-Tsun Huang, Jui-Cheng y Peng, Yung-Chow 09355212 Cl. xa0G06Fxa017 / 5081. Chen, Wei-Ming Hsieh, Cheng-Hsien Huang, Sung-Hui y Hsu, Kuo-Ching 09355980 Cl. xa0H01Lxa024 / 16. Chen, Yu-Feng Pu, Han-Ping Lin, Chun-Hung Lin, Chun-Cheng Cheng, Ming-Da y Wu, Kai-Chiang 09355928 Cl. xa0H01Lxa023 / 3128. Cheng, Chun-Wen Peng, Jung-Huei Tsai, Shang-Ying Tsai, Hung-Chia y Teng, Yi-Chuan 09352956 Cl. xa0B81Bxa07 / 0006. Cheng, Zhiyuan 09356103 Cl. xa0H01Lxa029 / 32. Ching, Kai-Ming Hsiao, Ching-Wen Wang, Tsung-Ding Tseng, Ming Hung y Chen, Chen-Shien 09355933 Cl. xa0H01Lxa023 / 46. Ching, Kuo - Cheng y Huang, Jiun - Jia 09355915 Cl. xa0H01Lxa021 / 82385. Chu, Cheng-Hsien Chen, Sheng-Chau Chang, Chun-Wei Hsu, Kai-Chun Lai, Chih-Yu Hsu, Wei-Cheng Tseng, Hsiao-Hui Chou, Shih Pei Ting, Shyh-Fann Hsu, Tzu-Hsuan Wang , Ching-Chun Tu, Yeur-Luen y Yaung, Dun-Nian 09355964 Cl. xa0H01Lxa023 / 544. Chu, Fu-Yu Cheng, Chih-Chang Lin, Tung-Yang y Liu, Ruey-Hsin 09356139 Cl. xa0H01Lxa029 / 7823. Chuang, Chun-Chieh Yaung, Dun-Nian Liu, Jen-Cheng Hung, Feng-Chi Hsu, Tzu-Hsuan Tsai, Shu-Ting y Kao, Min-Feng 09356066 Cl. xa0H01Lxa027 / 14636. Chuang, Chun-Chieh Yaung, Dun-Nian Liu, Jen-Cheng Wang, Wen-De Chou, Keng-Yu Tsai, Shuang-Ji y Kao, Min-Feng 09356058 Cl. xa0H01Lxa027 / 1462. Chuang, Harry Hak-Lay Kuo, Cheng-Cheng Tsai, Ching-Che y Young, Bao-Ru 09355209 Cl. xa0G06Fxa017 / 5081. Earle, Adrian y Katoch, Atul 09355697 Cl. xa0G11Cxa08 / 08. Holanda, Martin Christopher Passlack, Matthias y Oxland, Richard Kenneth 09355920 Cl. xa0H01Lxa022 / 12. Horng, Jaw-Juinn Liu, Szu-Lin y Chen, Chung-Hui 09354124 Cl. xa0G01Kxa07 / 01. JangJian, Shiu-Ko Chen, Kei-Wei y Wang, Ying-Lang 09356059 Cl. xa0H01Lxa027 / 14623. Kao, Min-Feng Yaung, Dun-Nian Liu, Jen-Cheng Hsu, Tzu-Hsuan Wang, Wen-De y Hsu, Wen-I 09355888 Cl. xa0H01Lxa021 / 76237. Kuo, Ying - Hao y Huang, Tien - Yu 09354390 Cl. xa0G02Bxa06 / 122. Lai, Wei-Han y Chang, Ching-Yu 09354521 Cl. xa0G03Fxa07 / 38. Lee, Cheng Hung Yang, XiuLi y Zhuang, Liangbo 09355686 Cl. xa0G11Cxa05 / 06. Liang, Shih-Wei Lu, Chun-Lin Wu, Kai-Chiang Yang, Ching-Feng Liu, Ming-Kai Miao, Chia-Chun y Wang, Yen-Ping 09355924 Cl. xa0H01Lxa023 / 13. Lin, Hsiu-Jen Lu, Wen-Hsiung Chen, Cheng-Ting Kuo, Hsuan-Ting Chen, Wei-Yu Cheng, Ming-Da y Liu, Chung-Shi 09355927 Cl. xa0H01Lxa023 / 3114. Lin, Jing-Cheng y Tsai, Po-Hao 09355977 Cl. xa0H01Lxa024 / 11. Lin, Yu Chao Chiu, Chang Yuan-Min, Ming-Ching Tsai, Hsin-Yi y Chen, Chao-Cheng 09355823 Cl. xa0H01Jxa037 / 32862. Liou, Huei-Ru Chou, Chien-Chih Thei, Kong-Beng y Shiau, Gwo-Yuh 09356108 Cl. xa0H01Lxa029 / 42364. Liu, Chi-Lin Hsieh, Shang-Chih Lu, Lee-Chung y Wu, Chang-Yu 09356583 Cl. xa0H03Kxa03 / 037. Lu, Chun-Lin y Wu, Kai-Chiang 09355982 Cl. xa0H01Lxa024 / 17. Shih, Chih-Tsung Yu, Chen Shinn-Sheng, Jeng-Horng y Yen, Anthony 09354507 Cl. xa0G03Fxa01 / 22. Shih, Yu-Nan 09355892 Cl. xa0H01Lxa021 / 76805. Shu, Chia-Pao Cheng, Chun-wen Chang, Kuei-Sung Huang, Hsin-Ting Tsai, Shang-Ying y Peng, Jung-Huei 09355896 Cl. xa0H01Lxa021 / 76838. Su, Chien-Chang Lin, Hsien-Hsin Kwok, Tsz-Mei Chen, Kuan-Yu Sung, Hsueh-Chang y Pai, Yi-Fang 09356150 Cl. xa0H01Lxa029 / 7851. Sung, Fu-Ting Liu, Shih-Chang y Tsai, Chia-Shiung 09356231 Cl. xa0H01Lxa043 / 12. Sung, Su - Jen y Su, Yi - Nien 09355894 Cl. xa0H01Lxa021 / 7681. Tai, Chih-Ho Chiang, Po-Jung Su, Bo-Chang Chen, Chi-Feng y Lin, Jung-I 09356060 Cl. xa0H01Lxa027 / 14623. Tsai, Chen Hao-Yi, Hsien-Wei Kuo, Hung-Yi Shao, Tung-Liang Chen, Ying-Ju Yu, Tsung-Yuan y Chen, Jie 09355954 Cl. xa0H01Lxa023 / 5223. Tsai, Po-Hao colgado, Jui-Pin y Lin, Jing-Cheng 09355973 Cl. xa0H01Lxa024 / 03. Tsai, Shang-Ying Hung, Li-Min y Peng, Jung-Huei 09352315 Cl. xa0B01Lxa03 / 502707. Wang, Bing 09355711 Cl. xa0G11Cxa011 / 419. Wu, Po-Chi Fang, Buh-Kuan Chang, Yung-Jung y Leu, Po-Hsiung 09356120 Cl. xa0H01Lxa029 / 66545. Wu, Tsung-Lin Hsieh, Tung-Heng Kuo, Jiun-Ming Chiang, Min-Hsiung y Hsu, Che-Yuan 09355912 Cl. xa0H01Lxa021 / 823437. Xu, Jeff J. 09356109 Cl. xa0H01Lxa029 / 49. Yang, Ching-Jung y Chen, Hsien-Wei 09355979 Cl. xa0H01Lxa024 / 13. Yang, Tsung - Ju 09356443 Cl. xa0H02Hxa09 / 046. Yu, Ching-Fang Hsu, Ting-Hao y Chin, Sheng-Chi 09354510 Cl. xa0G03Fxa01 / 46. Yu, Weibo Lu, Hsueh-Chin Chew, Han-Guan Huang, Kuo Bin Chen, Chao-Cheng y Jang, Syun-Ming 09355874 Cl. xa0H01Lxa021 / 6708. Yokoyama, Tsuyoshi Nishihara, Tokihiro y Sakashita, Takeshi 09356573 Cl. xa0H03Hxa09 / 02118. Matsushita, Ikuzo D0757847 Cl. xa0D18x201115. Tajima, Daisuke y Okita, Tadashi, a FANUC CORPORATION Controlador de motor que tiene la función de detección de anomalías de la unidad de transmisión de potencia entre el motor y el eje principal 09356550 Cl. xa0H02Pxa023 / 0036. Tajima, Ryota y Tokunaga, Hajime, a Semiconductor Energy Laboratory Co. Ltd. Procedimiento para la fabricación de un dispositivo semiconductor que tiene un antifuse con películas semiconductoras y aislantes como capa intermedia 09356030 Cl. xa0H01Lxa027 / 11206. Tajima, Takashi: Ver-- Kuwabara, Takeshi Kamiya, Takeshi Kitagawa, Yusuke y Tajima, Takashi 09351699 Cl. xa0A61Bxa06 / 542. Tsujikawa, Masanori Tsukada, Satoshi y Takada, Eiji 09355648 Cl. xa0G10Lxa021 / 034. Takada, Hitoshi: See-- Inoue, Ryoji Kotaki, Yasuo Ohashi, Tetsuya Takada, Hitoshi Fukushima, Takashi Murakami, Hironori Ikebe, Norihiro Fukuchi, Hironori Toda, Kyosuke Hayashi, Hiroki and Kitagawa, Takatoshi 09352576 Cl. xa0B41Jxa02/17523. Takada, Noboru: See-- Tanno, Atsushi Takada, Noboru Sato, Yuji Matsuda, Jun Kodama, Yuji and Imamiya, Susumu 09352523 Cl. xa0B29Dxa030/0681. Takada, Shigeaki: See-- Arimoto, Kota Nakayama, Toshinori Takada, Shigeaki Tamaki, Masayuki Akiyama, Naoki Asaka, Akeshi and Kakubari, Koichi 09354570 Cl. xa0G03Gxa015/2053. Ehara, Tadashi Sato, Masanori Itoh, Katsutoshi Takae, Shinji and Matsumura, Tomoaki 09357393 Cl. xa0H04Wxa012/08. Saito, Yuji and Takagi, Fumio 09352321 Cl. xa0B01Lxa07/52. Takagi, Junpei: See-- Nakatani, Ryusuke Matsumae, Keisaku Tsukamoto, Yasushi and Takagi, Junpei 09355342 Cl. xa0G06Kxa015/40. Takagi, Kazutaka to KABUSHIKI KAISHA TOSHIBA Joined structural body of members, joining method of members, and package for containing an electronic component 09357644 Cl. xa0H05Kxa01/09. Takagi, Masaya Takechi, Takaharu Kitagawa, Tomonori Wada, Kozue and Takahashi, Hiroshi, to Bridgestone Sports Co. Ltd. Wood golf club head D0757872 Cl. xa0D21x2011759. Takagi, Tetsuo and Uematsu, Hidekazu, to Seiko Epson Corporation Liquid discharge apparatus and head unit 09352557 Cl. xa0B41Jxa02/04541. Takagi, Toshiaki Ootani, Yousuke Sekine, Yusuke and Takashige, Ryuusuke, to TERUMO KABUSHIKI KAISHA Medical device 09352085 Cl. xa0A61Mxa05/158. Takagi, Yasunobu: See-- Takahashi, Tomoko Urayama, Taichi Takagi, Yasunobu Sugiyama, Hiroyuki Shakuto, Masahiko Nakagawa, Yoshinori Hoshi, Shotaro Kidera, Ryota and Yamada, Tatsumi 09354588 Cl. xa0G03Gxa021/0011. Takagi, Yuta: See-- Okazaki, Hiroshi Kawai, Kunihiro Narahashi, Shoichi Takagi, Yuta and Furuta, Takayuki 09356644 Cl. xa0H04Bxa01/50. Takagi, Yutaka: See-- Sugawara, Kentaro Ishikawa, Yuichi Takagi, Yutaka and Nara, Takao 09356864 Cl. xa0H04Lxa045/745. Ishida, Toshiyuki Takahashi, Akimichi Yamada, Hirokazu Kawagoe, Makoto and Kuramochi, Hiroyuki 09353927 Cl. xa0F21Vxa05/04. Takahashi, Daisuke to AJINOMOTO CO. INC. Method for producing peptide 09353147 Cl. xa0C07Kxa01/061. Takahashi, Daisuke to AJINOMOTO CO. INC. Method for producing peptide 09353148 Cl. xa0C07Kxa01/061. Takahashi, Eietsu to KABUSHIKI KAISHA TOSHIBA Nonvolatile semiconductor memory device and method of controlling the same 09355714 Cl. xa0G11Cxa011/5628. Takahashi, Eiji: See-- Kannaka, Masato Kajita, Masakazu Takahashi, Eiji Yamamoto, Yuji Akamatsu, Masaru Iba, Kunio and Imanishi, Kenji 09354047 Cl. xa0G01Bxa011/272. Takahashi, Genki Fukatsu, Masayoshi Tsuji, Hiroharu and Suzuki, Yohei, to Canon Kabushiki Kaisha Image forming apparatus 09354580 Cl. xa0G03Gxa015/6552. Takahashi, Hideaki Itoh, Michio Tanaka, Hidenori Mochiduki, Hisatomo and Masuda, Kumiko, to SENQCIA CO. LTD. Column base fitting and column base structure using it 09353544 Cl. xa0E04Hxa012/2261. Takahashi, Hideaki Uchino, Tooru Sagae, Yuta Umesh, Anil and Yagyu, Kengo, to NTT DOCOMO, INC. Radio base station and mobile station 09357531 Cl. xa0H04Wxa072/0406. Takahashi, Hideo: See-- Nakagaki, Shigeo Kamimura, Kosei Ishikawa, Yoshinobu Takahashi, Hideo Kikuchi, Takayuki and Yamaguchi, Satoshi 09352937 Cl. xa0B66Bxa023/12. Takahashi, Hiroshi: See-- Kakinuma, Akihiro Takahashi, Hiroshi Kamijo, Naohiro Tsumura, Norimichi and Tanaka, Satomi 09355466 Cl. xa0G06Txa07/408. Takagi, Masaya Takechi, Takaharu Kitagawa, Tomonori Wada, Kozue and Takahashi, Hiroshi D0757872 Cl. xa0D21x2011759. Takahashi, Hisayuki and Okada, Yoshiyuki, to RISO KAGAKU CORPORATION Inkjet printer 09352555 Cl. xa0B41Jxa02/0454. Takahashi, Junichi: See-- Gao, Yunzhi Takahashi, Junichi Muramatsu, Gyo Obara, Ryo Miyashita, Tetsuji and Watanabe, Tadahiko 09353864 Cl. xa0F16Jxa09/203. Takahashi, Keiichiro to TOSHIBA TEC KABUSHIKI KAISHA Barcode printer D0757848 Cl. xa0D18x201150. Takahashi, Keiichiro to TOSHIBA TEC KABUSHIKI KAISHA Barcode printer D0757849 Cl. xa0D18x201150. Takahashi, Keiji and Tsumiyama, Yoshinori, to KAWASAKI JUKOGYO KABUSHIKI KAISHA Utility vehicle 09352496 Cl. xa0B29Cxa035/08. Takahashi, Kiwamu: See-- Tanaka, Tohru Nakajima, Motowo Takahashi, Kiwamu Ishii, Takuya Kido, Hiroshi Chida, Junji and Yamane, Kazuhiko 09351949 Cl. xa0A61Kxa031/197. Takahashi, Kiyohiko to NEC CORPORATION Power supply circuits 09354653 Cl. xa0G05Fxa03/04. Takahashi, Masaki Tanabe, Takamasa Ito, Mai and Nokura, Yoshihiko, to Sumitomo Chemical Company, Limited Fused heterocyclic compound 09353110 Cl. xa0C07Dxa0471/04. Takahashi, Masaki Suzuki, Hidenori Nagumo, Satoru and Iwano, Akira, to IHI CORPORATION Blanket installation method 09353911 Cl. xa0F17Cxa03/04. Takahashi, Masaki and Yamaguchi, Mamoru, to Sony Corporation Electronic device 09355608 Cl. xa0G09Gxa05/00. Takahashi, Masanori: See-- Uchida, Yasuyoshi Taniguchi, Yuuki Kawashima, Hiroshi Nara, Kazutaka and Takahashi, Masanori 09354395 Cl. xa0G02Bxa06/136. Takahashi, Mitsunori Tomoe, Ginpei and Watanabe, Taku, to KABUSHIKI KAISHA SQUARE ENIX Video game processing apparatus, method and computer program product of processing video game 09352221 Cl. xa0A63Fxa013/10. Takahashi, Osamu: See-- Omatsu, Tadashi Nakayama, Hajime Matsufuji, Akihiro Takahashi, Osamu Nimura, Shigeaki and Nishiura, Yousuke 09354356 Cl. xa0G02Bxa01/08. Takahashi, Richard J. to SECTURION SYSTEMS, INC. Multi-tenancy architecture 09355279 Cl. xa0G06Fxa021/72. Takahashi, Rintaro Suzuki, Kazumi Shiba, Masana Morita, Tatsuya Yamauchi, Yoshitaka and Miyaake, Azumi, to Ricoh Company, Ltd. Electrophotographic toner, two-component developer containing toner, and image forming apparatus 09354533 Cl. xa0G03Gxa09/0821. Takahashi, Ririka: See-- Tanizawa, Yoshimichi Sato, Hideaki Takahashi, Ririka Kawamura, Shinichi and Murai, Shinya 09356780 Cl. xa0H04Lxa09/0852. Takahashi, Shintaro to OLYMPUS CORPORATION Optical scanning device and scanning inspection apparatus 09354442 Cl. xa0G02Bxa026/105. Takahashi, Tatsuya Osaka, Takanobu Nakamura, Naoki Fujita, Kazuhiro and Nishimori, Takehiro, to RICOH COMPANY, LTD. Light source unit, lighting apparatus and image projection apparatus 09354498 Cl. xa0G03Bxa021/2066. Takahashi, Tomohiro Ono, Takayuki Furukawa, Masao Hinami, Jun Shibata, Takeshi Shimamura, Ryo Enomoto, Takanori Otaka, Shimpei and Ishikawa, Masashi, to Canon Kabushiki Kaisha Electric connection method 09352562 Cl. xa0B41Jxa02/14072. Takahashi, Tomoko Urayama, Taichi Takagi, Yasunobu Sugiyama, Hiroyuki Shakuto, Masahiko Nakagawa, Yoshinori Hoshi, Shotaro Kidera, Ryota and Yamada, Tatsumi, to Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus and image forming method that remove toner from a cleaning blade for an image bearer by inversely rotating the image bearer 09354588 Cl. xa0G03Gxa021/0011. Takahashi, Toshiaki Hidaka, Tomoya and Asanuma, Daisuke, to Nippon Soda Co. Ltd. Organosilicon compound, thin film forming composition using same, and organic thin film 09353288 Cl. xa0C09Dxa0183/06. Takahashi, Yukio Futamura, Yuya Hayashi, Koichi Tanaka, Hiroki Ozawa, Naoya and Maruyama, Naoyuki, to CENTRAL JAPAN RAILWAY COMPANY Passenger carrying car D0757605 Cl. xa0D12x201142. Takahashi, Yuya Nakamura, Hitoshi Kanamura, Shohei Yamada, Akira Mizuguchi, Koji and Oomori, Takashi, to KABUSHIKI KAISHA TOSHIBA Method of separating and recovering metals and system for separating and recovering metals 09353452 Cl. xa0C25Cxa07/06. Mukai, Tsutomu and Takai, Hitoshi 09357441 Cl. xa0H04Wxa036/0016. Takai, Kazumasa: See-- Hioki, Kosaku Takai, Kazumasa Naganuma, Takeshi and Niwa, Yoshihiro 09356545 Cl. xa0H02Pxa06/182. Takai, Shingo: See-- Ueda, Naoto Nakura, Makoto Takai, Shingo Ueda, Satoshi and Kudo, Koichi 09354537 Cl. xa0G03Gxa015/0131. TAKAI TOFU 38 SOYMILK EQUIPMENT CO. See-- Takai, Toichiro Takeda, Masahide Honda, Kenji and Hirata, Toshio 09352866 Cl. xa0B65Bxa035/36. Takai, Toichiro Takeda, Masahide Honda, Kenji and Hirata, Toshio, to TAKAI TOFU 38 SOYMILK EQUIPMENT CO. Packing device of tofu 09352866 Cl. xa0B65Bxa035/36. Takami, Kana to RICOH COMPANY, LTD. Information processing system, information processing apparatus, and computer program product 09354999 Cl. xa0G06Fxa011/3013. Komorita, Hiroshi Nakayama, Noritaka and Takanami, Kentaro 09356101 Cl. xa0H01Lxa029/2003. Takane, Kunio to CANON KABUSHIKI KAISHA Image forming apparatus for forming output sheet bundles inserted with tabbed sheets, and control method and storage medium therefor 09354579 Cl. xa0G03Gxa015/6529. Takano, Hiroaki Morioka, Yuichi and Sawai, Ryo, to Sony Corporation Base station, user equipment, communication control method, and radio communication system 09357455 Cl. xa0H04Wxa036/0088. Takano, Rikuo: See-- Tanaka, Fuminori Horibe, Ryusuke Inoda, Takeshi Takano, Rikuo Sugiyama, Kiyoshi Fukuoka, Toshimi and Ono, Masatoshi 09357313 Cl. xa0H04Rxa019/04. Takano, Taishi: See-- Yoshida, Maiko Araki, Satoshi Takano, Taishi and Urabe, Takashi 09354532 Cl. xa0G03Gxa09/081. 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Tsai, Shu-Hsiao Chang, Hsiu-Chen Takatani, Shinichiro and Lin, Cheng-Kuo 09356127 Cl. xa0H01Lxa029/737. Takagi, Masaya Takechi, Takaharu Kitagawa, Tomonori Wada, Kozue and Takahashi, Hiroshi D0757872 Cl. xa0D21x2011759. Aizawa, Takeshi Morikawa, Satoshi Uchiyama, Yoshihiro Takeda, Kazuaki and Tonosaki, Takashi 09356388 Cl. xa0H01Rxa013/5227. Kono, Katsuichi Yokota, Junichi and Takeda, Ken 09356479 Cl. xa0H02Kxa01/223. Takeda, Masahide: See-- Takai, Toichiro Takeda, Masahide Honda, Kenji and Hirata, Toshio 09352866 Cl. xa0B65Bxa035/36. Takeda, Migiwa: See-- Tanaka, Maiko Mitsuzawa, Shigenobu Shinkawa, Satoru Shibata, Daisuke Ara, Takeshi and Takeda, Migiwa 09353364 Cl. xa0C12Nxa09/2445. Takeda Pharmaceutical Company Limited: See-- Kasai, Shizuo Hirose, Hideki Yamasaki, Takeshi Yamashita, Tohru and Kina, Asato 09353108 Cl. xa0C07Dxa0471/04. Takeda, Sachio: See-- Koba, Daisuke Takeda, Sachio Maegawa, Katsunori Sato, Naoto and Osaka, Tetsuya 09354278 Cl. xa0G01Rxa031/3662. 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Xia, Xianzhi Zhao, Jin Liu, Yuexiang Zhang, Jigui Li, Weili Tan, Yang Qiao, Suzhen Peng, Renqi Gao, Ping Yin, Maoping and Zhang, Tianyi 09353197 Cl. xa0C08Fxa010/00. Tan, Zhimin Hou, Yucheng Bush, Christopher Rosche, John and Hill, Tricia, to GE Oil 38 Gas UK Limited Buoyancy compensating element and method 09353579 Cl. xa0E21Bxa017/015. Tan, Zhiyong: See-- Liu, Lin and Tan, Zhiyong 09356221 Cl. xa0H01Lxa041/053. Takahashi, Masaki Tanabe, Takamasa Ito, Mai and Nokura, Yoshihiko 09353110 Cl. xa0C07Dxa0471/04. Tanabe, Tetsuya: See-- Hanashi, Takuya and Tanabe, Tetsuya 09354171 Cl. xa0G01Nxa021/64. Tanahashi, Hiroyuki and Tomokiyo, Toshimasa, to NIPPON STEEL 38 SUMITOMO METAL CORPORATION High strength steel sheet excellent in delayed fracture resistance and low temperature toughness, and high strength member manufactured using the same 09353424 Cl. xa0C21Dxa09/46. Tanahashi, Kazuhiro Nakanishi, Megumi Yamamura, Yasufumi and Fujita, Masaki, to Toray Industries, Inc. 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Tanaka, Hiroki: See-- Nakata, Tetsuyoshi Harada, Yasunari Watanabe, Jun Fukasawa, Tomoko Satoh, Ryuuichi Tanaka, Hiroki and Hosokawa, Toshiaki 09352598 Cl. xa0B41Jxa029/38. Takahashi, Yukio Futamura, Yuya Hayashi, Koichi Tanaka, Hiroki Ozawa, Naoya and Maruyama, Naoyuki D0757605 Cl. xa0D12x201142. Tanaka, Hiroyasu: See-- Fukuzumi, Yoshiaki Katsumata, Ryota Kidoh, Masaru Kito, Masaru Tanaka, Hiroyasu Komori, Yosuke Ishiduki, Megumi and Aochi, Hideaki 09356042 Cl. xa0H01Lxa027/11582. Tanaka, Issei: See-- Sato, Haruo and Tanaka, Issei 09354430 Cl. xa0G02Bxa013/04. Tanaka, Kazuhiro Shimanaka, Tsuneki and Okawa, Chie, to MAZDA MOTOR CORPORATION Rear structure of vehicle 09352693 Cl. xa0B60Rxa05/04. Tanaka, Kenichi to Canon Kabushiki Kaisha Image heating apparatus and image forming apparatus 09354562 Cl. xa0G03Gxa015/2028. Tanaka Kikinzoku Kogyo K. K. See-- Okazaki, Tsuyoshi and Ezawa, Nobuyasu 09353448 Cl. xa0C25Bxa011/0431. Tanaka, Kunihiro to Nachi-Fujikoshi Corp. 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Tanaka, Takayoshi Yamakawa, Mai and Yamaguchi, Takahiro, to SCREEN Holdings Co. Ltd. Substrate treatment apparatus and substrate treatment method 09355872 Cl. xa0H01Lxa021/67028. Tanaka, Tohru Nakajima, Motowo Takahashi, Kiwamu Ishii, Takuya Kido, Hiroshi Chida, Junji and Yamane, Kazuhiko, to SBI Pharmaceuticals Co. Ltd. Prophylactic/therapeutic agent for influenza virus infection 09351949 Cl. xa0A61Kxa031/197. Tanaka, Yoshiaki to Kabushiki Kaisha Toshiba Image forming apparatus with holding unit for charging electrode 09354539 Cl. xa0G03Gxa015/0291. Tanaka, Yoshikazu: See-- Kinoshita, Akihiro Tanaka, Yoshikazu Tsutsui, Risa and Guo, Hongyang 09354833 Cl. xa0G06Fxa03/1285. Tanaka, Yoshinori: See-- Kuwamura, Yoshihiro Matsumoto, Kazuyuki Oyama, Hiroharu Tanaka, Yoshinori and Matsuo, Asaharu 09353640 Cl. xa0F01Dxa011/04. Tanaka, Yoshiyuki and Sakai, Hiroaki, to Seiko Epson Corporation Ink tank and printer 09352577 Cl. xa0B41Jxa02/17523. Del Beccaro, David J. Farber, Stuart H. 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